เรียนออกแบบ
ฟันกรามน้อยที่แข็งแรงทั้งหมด 143 ซี่ ซึ่งถอนออกเพื่อจัดฟันจากบุคคลอายุ 18-20 ปี ได้รับการเก็บรวบรวมตามโปรโตคอลที่ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการตรวจสอบจริยธรรมของมหาวิทยาลัยการแพทย์ชีราซ (IR.SUMS.DENTAL.REC.1400.146) ฟันที่ถอนออกได้รับการทำความสะอาดเนื้อเยื่อและเศษซากที่เหลืออย่างทั่วถึงโดยใช้แปรงป้องกัน และฆ่าเชื้อโดยการแช่ในสารละลายคลอรามีน T 0.1% เป็นเวลาสี่สัปดาห์ ตัวอย่างจะถูกเก็บไว้ในน้ำดีไอออนไนซ์ ซึ่งจะต้องเปลี่ยนใหม่ทุกสัปดาห์ที่อุณหภูมิ 25 °C จนกว่าจะใช้งาน ก่อนเริ่มการศึกษา ตัวอย่างจะได้รับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์สเตอริโอ (Motic K, Wetzlar, Germany) ที่กำลังขยาย x 40 เพื่อแยกฟันที่มีข้อบกพร่องหรือรอยแตกออก โดยรวมแล้ว มีฟัน 130 ซี่ที่ตรงตามเกณฑ์การรวม ตัวอย่างที่เตรียมไว้จะถูกทดสอบด้วยการกัดกร่อนและขัดถู และใช้ยาสีฟันและน้ำยาบ้วนปากร่วมกันหลายแบบ ความแข็งของพื้นผิว ค่าความหยาบของพื้นผิว และโครงสร้างของเนื้อฟัน ได้รับการประเมินใน 3 ระยะ ได้แก่ เนื้อฟันที่แข็งแรง (พื้นฐาน) เนื้อฟันที่มีการสึกกร่อนครั้งแรก และเนื้อฟันที่มีการสร้างแร่ธาตุใหม่
การจัดเตรียมตัวอย่าง
รากฟันถูกถอนออกประมาณ 2 มม. ใต้รอยต่อระหว่างซีเมนโตและเคลือบฟัน และใส่ครอบฟันในเรซินอะคริลิกที่บ่มตัวเอง โดยให้พื้นผิวด้านแก้มขนานกับแม่พิมพ์ เคลือบฟันถูกถอนออกอย่างแม่นยำโดยใช้หัวจับความเร็วสูง และเนื้อฟันที่เปิดออกถูกขัดด้วยกระดาษทรายซิลิกอนคาร์ไบด์กันน้ำเบอร์ 320, 600, 1200 และ 2400 (Buehler, Lake Bluff, IL, USA) จากนั้นตัวอย่างที่ขัดแล้วจะถูกแช่และทำความสะอาดในอ่างอัลตราโซนิกเป็นเวลา 5 นาที พิสูจน์ว่าสามารถขจัดเคลือบฟันออกจากพื้นผิวฟันได้หมดโดยใช้กล้องจุลทรรศน์สเตอริโอที่กำลังขยาย x10 ทาน้ำยาเคลือบเล็บ 2 ชั้นปิดพื้นผิวเนื้อฟันด้วยหน้าต่างที่เปิดออกขนาด 2 x 5 มม. เพื่อทำให้พื้นผิวที่แทรกแซงเป็นมาตรฐาน จากนั้นตัวอย่างจะถูกสุ่มแบ่งเป็น 5 กลุ่มทดลอง แต่ละกลุ่มประกอบด้วยฟัน 26 ซี่ โดยมี 12 ซี่สำหรับการทดสอบความแข็งของไมโครพื้นผิว 12 ซี่สำหรับการวัดความหยาบของพื้นผิว และ 2 ซี่สำหรับการประเมินด้วยกล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม (AFM)
การสร้างรอยโรคที่กัดกร่อนในระยะเริ่มต้นและการก่อตัวของเกล็ด
เพื่อกระตุ้นให้เกิดรอยโรคกัดกร่อนในขั้นต้น ตัวอย่างแต่ละชิ้นจะถูกนำไปสัมผัสกับกรดซิตริก 0.1% ปริมาตร 20 มล. ที่มีค่า pH 2.5 เป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส โดยใช้เครื่องกวน (Alfa D500 อิหร่าน) ที่ความเร็วรอบ 60 รอบต่อนาที โดยเปลี่ยนกรดซิตริกทุกๆ 5 นาที จากนั้นจึงล้างตัวอย่างด้วยน้ำที่ผ่านการดีไอออนไนซ์เป็นเวลา 30 วินาที
เพื่อจำลองสภาพช่องปากได้ดีขึ้น ตัวอย่างจะถูกเก็บไว้ในน้ำลายเทียม (20 มล. ต่อชิ้น) ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เพื่อสร้างเยื่อน้ำลายบนพื้นผิวของเนื้อฟัน องค์ประกอบของน้ำลายเทียมประกอบด้วยกลูโคส 0.2 มิลลิโมลาร์ โซเดียมคลอไรด์ 0.1 มิลลิโมลาร์8ชม15NaO, NaCl 9.9 มิลลิโมลาร์, CaCl 1.5 มิลลิโมลาร์2·ชม2โอ 3 มิลลิโมลาร์ NH4Cl, KCl 17 มิลลิโมลาร์, NaSCN 2 มิลลิโมลาร์, K 2.4 มิลลิโมลาร์2เอชพีโอ4ยูเรีย 3.3 มิลลิโมลาร์, โซเดียมไฮดรอกไซด์ 2.4 มิลลิโมลาร์2หลังจาก4และกรดแอสคอร์บิก 11 µM (pH 6.8)21น้ำลายเทียมที่จำเป็นสำหรับการสร้างฟิล์ม การกัดกร่อน และการเตรียมสารละลายยาสีฟัน ได้รับการเตรียมไว้ทุกสัปดาห์และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส
การจัดสรรกลุ่ม
กลุ่มทดลองทั้ง 5 กลุ่ม มีดังนี้
กลุ่มที่ 1 (กลุ่มควบคุมเชิงลบ) :
ตัวอย่างถูกแช่อยู่ในน้ำลายเทียมระหว่างการท้าทายแบบกัดกร่อนและขัดสี
กลุ่มที่ 2 (กลุ่มควบคุมเชิงบวก) (ยาสีฟันและน้ำยาบ้วนปากที่มีส่วนผสมของ AmF (olaflur), NaF และ SnCl2–
ตัวอย่างถูกนำไปสัมผัสกับยาสีฟัน Elmex erosion protection ที่มีความเข้มข้น 1,400 ppm F และ 3500 ppm Sn2+ (GABA International AG, Switzerland) ตามด้วยน้ำยาบ้วนปากป้องกันการกัดกร่อน Elmex ที่มีความเข้มข้น 500 ppm F และ 800 ppm Sn2+–
กลุ่มที่ 3 (ยาสีฟันและน้ำยาบ้วนปากที่มีส่วนผสมของโซเดียมโมโนฟลูออโรฟอสเฟต (SMFP) และไฮดรอกซีอะพาไทต์) :
ตัวอย่างถูกนำไปทดสอบกับยาสีฟัน Vitis anticaries biorepair ที่มีความเข้มข้น 1,450 ppm F และไฮดรอกซีอะพาไทต์ 4,500 ppm (VITIS Oral Health C/O Dent-O-Care, สหราชอาณาจักร) ตามด้วยการบ้วนปากด้วยน้ำยาบ้วนปาก Vitis anticaries biorepair ที่มีความเข้มข้น 226 ppm F และไฮดรอกซีอะพาไทต์ 125 ppm
กลุ่มที่ 4 (ยาสีฟันที่มี NaF และ SnF2 และน้ำยาบ้วนปากที่มี NaF):
ยาสีฟัน ออรัลบี โปร-เอ็กซ์เพิร์ท (1450 ppm F และ 3230 ppm Sn2+) (Procter and Gamble, USA) ถูกใช้แล้ว ตามด้วยการบ้วนปากด้วยน้ำยาบ้วนปาก Oral B Fluorinse (226 ppm F–
กลุ่มที่ 5 (ยาสีฟันที่มี NaF และ CPP-ACP และน้ำยาบ้วนปากที่มีไอออน Ca และ P อิ่มตัวเกิน)
การแทรกแซงบนพื้นผิวที่กัดกร่อนได้ดำเนินการโดยใช้ยาสีฟัน MI Paste ONE (1100 ppm F) (GC America) ตามด้วยการบ้วนปากด้วยน้ำยาบ้วนปาก Caphosol (EU Pharma, USA) ซึ่งบรรจุขวด A และ B สองขวด โดยมีอัตราการผสมเท่ากัน
ยาสีฟันและน้ำยาบ้วนปากที่ใช้ในการศึกษานี้และส่วนประกอบของยาสีฟันและน้ำยาบ้วนปากแสดงอยู่ในตารางที่ 1
โปรโตคอลการท้าทายการกัดกร่อน
โปรโตคอลการทดสอบการกัดกร่อนประกอบด้วยการสัมผัสกับกรดซิตริก 0.1% ที่ pH 2.5 เป็นเวลา 90 วินาทีเป็นเวลา 5 วัน สี่ครั้งต่อวัน (10.00 น., 12.00 น., 14.00 น. และ 16.00 น.) เป็นเวลา 90 วินาที เป็นเวลา 5 วัน หลังจากการทดสอบแต่ละครั้ง ให้ล้างตัวอย่างด้วยน้ำดีไอออนไนซ์เป็นเวลา 10 วินาที และเก็บไว้ในน้ำลายเทียม 20 มล. โดยฟักที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสจนกว่าจะถึงการทดสอบครั้งต่อไป นอกจากนี้ ให้เก็บตัวอย่างในน้ำลายเทียมข้ามคืน ยาสีฟันและน้ำยาบ้วนปากของแต่ละกลุ่มถูกทาที่ผิวเดนติน 30 นาทีหลังจากสัมผัสกรดครั้งแรกและครั้งสุดท้าย เปลี่ยนกรดซิตริกและน้ำลายเทียมทุกวัน
การเติมแร่ธาตุให้กับผิวเนื้อฟันที่ถูกกัดกร่อน
เตรียมสารละลายยาสีฟันสำหรับกลุ่ม 2 ถึง 5 ทุกวันโดยผสมยาสีฟัน 100 มก. กับน้ำลายเทียม 300 มก. โดยใช้เครื่องกวนที่ความเร็ว 60 รอบต่อนาที ทดสอบการขัดถูโดยใช้เครื่องแปรงฟันอัตโนมัติสองห้อง (Shiraz Electric, Shiraz, Iran) หลังจากวางตัวอย่างลงในช่องที่เต็มไปด้วยสารละลายยาสีฟันเป็นเวลา 1 นาที ให้แปรงพื้นผิวของเนื้อฟันด้วยแปรงสีฟันขนนุ่ม (Oral B Health Clean Manual Toothbrush, Procter and Gamble, USA) ภายใต้แรงคงที่ 2.5 นิวตันด้วยจังหวะ 120 ครั้งต่อนาทีเป็นเวลา 15 วินาที จากนั้นล้างฟันแต่ละซี่ด้วยน้ำดีไอออนไนซ์เป็นเวลา 10 วินาที และแช่ในน้ำยาบ้วนปากเป็นเวลา 30 วินาทีด้วยความเร็ว 60 รอบต่อนาที เพื่อเลียนแบบการบ้วนปากด้วยน้ำยาบ้วนปากในช่องปาก ตัวอย่างในกลุ่ม 1 (กลุ่มควบคุมเชิงลบ) จะถูกแปรงด้วยน้ำลายเทียมโดยไม่ใช้ยาสีฟันและน้ำยาบ้วนปาก ในตอนท้ายของวันที่ห้า ได้มีการทดสอบในห้องปฏิบัติการเพื่อประเมินการเปลี่ยนแปลงของความแข็งของพื้นผิว ความหยาบ และโครงสร้างของเนื้อฟัน
การทดสอบความแข็งของพื้นผิว
ค่าความแข็งของไมโครของแต่ละกลุ่ม (n = 12) วัดโดยใช้เครื่องเจาะแบบ Vickers diamond indenter (ZwickRoell, Fürstenfeld, Austria) ที่แรง 50 g เป็นเวลา 15 วินาที และที่ 5 จุดที่มีระยะห่าง 50 µm ต่อตัวอย่าง การวัดซ้ำใน 3 ขั้นตอน ได้แก่ เดนตินที่แข็งแรง (พื้นฐาน) เดนตินที่มีการสึกกร่อนในช่วงแรก และเดนตินที่มีแร่ธาตุเพิ่มขึ้น เปอร์เซ็นต์การฟื้นตัวของความแข็งไมโครของเดนติน (%RDMH) คำนวณโดยใช้ค่าความแข็งของ Vickers เฉลี่ย (VHN) ในแต่ละกลุ่มโดยใช้สูตรต่อไปนี้:
$$\mathrm{\%RDMH}=\frac{\mathrm{ VHN\,of\,remineralized\,dentin }-\mathrm{VHN\,of\,eroded\,dentin }}{\mathrm{VHN\,of\,sound\,dentin }-\mathrm{VHN\,of\,eroded\,dentin }}\times 100$$
การทดสอบความหยาบของพื้นผิว
เพื่อประเมินความหยาบของพื้นผิว (Ra) ของตัวอย่างในแต่ละกลุ่ม (n = 12) จะใช้โพรฟิโลมิเตอร์แบบสัมผัส (TESA RUGOSURF 20, สวิตเซอร์แลนด์) เพื่อสแกน 5 จุดด้วยระยะทางเท่ากันที่ 250 µm จิ๊กซิลิโคนสำหรับอุดช่องว่างที่มีพื้นที่สัมผัสเท่ากันถูกสร้างขึ้นบนแม่พิมพ์แต่ละอันเพื่อให้สามารถวัดค่าได้หลายครั้ง ค่า Ra ที่สอดคล้องกับสภาพของเนื้อฟันที่สมบูรณ์ (พื้นฐาน) เนื้อฟันที่มีการสึกกร่อนในช่วงแรก และเนื้อฟันที่มีแร่ธาตุเพิ่มขึ้นจะถูกบันทึกและวิเคราะห์ด้วยซอฟต์แวร์ RUGOSOFT
เปอร์เซ็นต์การฟื้นตัวของความหยาบของเนื้อฟัน (%RDR) ได้รับการคำนวณดังนี้:
$$\mathrm{\%RDR}=\frac{\mathrm{ Ra\,of\,remineralized\,dentin }-\mathrm{Ra\,of\,eroded\,dentin }}{\mathrm{Ra\,of\,sound\,dentin }-\mathrm{Ra\,of\,eroded\,dentin }}\times 100$$
นอกจากนี้ เปอร์เซ็นต์ของการสูญเสียพื้นผิวของเนื้อฟันที่มีการเติมแร่ธาตุใหม่เมื่อเทียบกับเนื้อฟันที่ถูกกัดกร่อนและแข็งแรง (พื้นฐาน) ได้รับการคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้:
$${\mathrm{\%การสูญเสียพื้นผิว}}_{{\text{การเติมแร่ธาตุ}}-{\text{การกัดเซาะ}}}=\frac{\mathrm{ Ra\,ของ\,การเติมแร่ธาตุ\,เนื้อฟัน }-\mathrm{Ra\,ของ\,การกัดเซาะ\,เนื้อฟัน }}{\mathrm{ Ra\,ของ\,การกัดเซาะ\,เนื้อฟัน }}\times 100$$
$${\mathrm{\%การสูญเสียพื้นผิว}}_{{\text{การสร้างแร่ธาตุใหม่}}-{\text{ฐาน}}}=\frac{\mathrm{ Ra\,ของ\,การสร้างแร่ธาตุใหม่\,เนื้อฟัน }-\mathrm{Ra\,ของ\,เสียง\,เนื้อฟัน }}{\mathrm{ Ra\,ของ\,เสียง\,เนื้อฟัน }}\times 100$$
การประเมินลักษณะพื้นผิว
ตัวอย่างสองตัวอย่างในแต่ละกลุ่มได้รับการเลือกแบบสุ่มเพื่อประเมิน AFM (n = 10) ลักษณะพื้นผิวของตัวอย่างเนื้อฟันได้รับการตรวจสอบโดยใช้เครื่องมือ AFM (AFM, JPK Nanowizard II apparatus, JPK instruments, Berlin, Germany) ร่วมกับแคนติลีเวอร์ซิลิกอนไนไตรต์ที่ไม่นำไฟฟ้า (Acta-Probe, APPNano, CA) และเครื่องสแกนเพียโซอิเล็กทริก
พื้นที่การวัดสำหรับแต่ละตัวอย่างคือ 5 µm × 5 µm
การวิเคราะห์ทางสถิติ
การวิเคราะห์ข้อมูลดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS เวอร์ชัน 22 (IBM, NY, USA) การเปรียบเทียบค่าความแข็งของไมโครพื้นผิวและความหยาบในห้ากลุ่มที่แตกต่างกันดำเนินการโดยใช้ ANOVA ทางเดียวและการทดสอบหลังการทดลอง Tukey HSD % การสูญเสียพื้นผิว การเติมแร่ธาตุ-พื้นฐาน ระหว่าง 5 กลุ่ม เปรียบเทียบกันโดยใช้ One-way ANOVA และการทดสอบหลังการทดลอง Tukey HSD คอลัมน์การคืนแร่ธาตุ ค่า ∆ ระหว่างการกัดเซาะเริ่มต้น (จุดเวลาที่สอง) และการคืนแร่ธาตุ (จุดเวลาที่สาม) (∆32), %RDMH, %RDR และ %การสูญเสียพื้นผิวการคืนแร่ธาตุ-การกัดเซาะ เปรียบเทียบระหว่าง 5 กลุ่มโดยใช้การวิเคราะห์ทางสถิติแบบทางเดียวและการทดสอบหลังการรักษา T2 ของ Tamhane นอกจากนี้ ยังใช้การวิเคราะห์ทางสถิติแบบวัดซ้ำและการทดสอบหลังการรักษา Sidak เพื่อเปรียบเทียบค่าความแข็งและความหยาบของเนื้อฟันที่แข็งแรง เนื้อฟันที่สึกกร่อน และความแข็งและความหยาบของเนื้อฟันที่คืนแร่ธาตุแล้วภายในกลุ่ม โดยพิจารณาระดับนัยสำคัญที่ 0.05 สำหรับการทดสอบทางสถิติทั้งหมด
การอนุมัติทางจริยธรรม
การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการตรวจสอบจริยธรรมของคณะทันตแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยวิทยาศาสตร์การแพทย์ชีราซ (IR.SUMS.DENTAL.REC.1400.146)
ความยินยอมในการเข้าร่วม
วิธีการทั้งหมดดำเนินการตามแนวทางและระเบียบที่เกี่ยวข้อง (ประกาศเฮลซิงกิ) ได้รับความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรสำหรับการใช้ฟันจากผู้เข้าร่วม